1. 革兰氏阴性菌细碎后离心法获取沉淀自己，trisbuffer清洗包涵体3-5次，跑胶检测工具包涵体纯净度
2. 用5-10ml 6M酸洗胍（ph1.5）溶解出来包涵体，在常温搅拌装置30min-1h，抽滤避开不溶物；
3. 将融掉后包涵体蛋清迅猛滴定到4℃预冷pbs中，较慢打料，包夜复性，离心力清理沉淀自己；

4. 缓慢加（40%）硫酸铵，3h后离心去沉淀（未完全复性的蛋白）；加终浓度70%硫酸铵，4℃过夜孵育，离心取沉淀，溶解到5-10ml pbs中即为目的蛋白。
   
   

图1.包涵做体检测

泳道1：硝酸胍降解包涵体  泳道2：包涵体洗涤剂后

图2.核蛋白复性后测量

2.孵育结束后转移beads至层析柱，依次用不同浓度咪唑Wash buffer冲洗柱子；

3.Elute buffer洗脱蛋白后跑胶检测纯度；

4.包涵体复性：变性蛋白测浓度后滴定入复性buffer（ 100 mM Tris–HCl, 0.5M 甘氨酸, 1 mM氧化型谷胱甘肽,10 mM 还原型谷胱甘肽, pH8.0） ，使蛋白终浓度为0.1mg/ml， 缓慢搅拌，4℃复性反应过夜，离心去除沉淀，上清转移到透析袋，pbs透析4h，换液至少2次，浓缩后过分子筛。

图3.包涵体纯化结论

泳道1为包涵体溶解后上清，泳道2为包涵体溶解后沉淀，泳道3为20mM洗杂，泳道4为40mM洗杂，
泳道5为60mM洗杂，泳道6为100mM洗杂，泳道7为300mM洗脱，泳道8、9为500mM洗脱

图4.复性后判断的结果

柱上复性